硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測試盒微量法

商品介紹：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

100 T GSH—ST測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

25mL Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (non-reducing,6X)   Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (non-reducing,6X)   常溫保存

100mg  Monensin （蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

2 ug pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-Neo 低溫運輸，-20℃保存

BYP瓊脂培養(yǎng)基  250g

1瓶 NTERA-2細(xì)胞株 NTERA-2 低溫運輸和保存

胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）（ISO9038-1-2000）  250g

100mg 5-溴-2'-脫氧尿苷 5-Bromo-2’-Deoxyuridine -20℃保存

500mL Tris-Tricine-SDS Running Buffer,Anode,10X  Tris-Tricine-SDS Running Buffer,Anode,10X  常溫保存

5mL AEBSF溶液，10mg/mL AEBSF Solution -20℃保存

2 ug pTYB 2 pTYB 2 低溫運輸，-20℃保存

硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測試盒微量法p53BP1/53BP1  p53結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlSmad4  Smad4抗體 規(guī)格: 0.1ml

NFKBIB/IKB beta  核因子κB抑制蛋白β抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-IKK gamma(Ser43)  磷酸化KB抑制蛋白激γ抗體 規(guī)格: 0.1ml

ADAM18  去整合素樣金屬蛋白18抗體 規(guī)格: 0.2mlTestis  瘤抑制基因Testin抗體 規(guī)格: 0.2ml

AQP3  水通道蛋白-3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Slc26a5  覺神經(jīng)性耳聾常染色體隱性遺傳61抗體 規(guī)格: 0.2ml

HAUS4/C14orf94  14號染色體開放閱讀框94抗體 規(guī)格: 0.2ml

RXR beta/RXRB  核受體RXRβ抗體 規(guī)格: 0.1ml

MEF2A  肌細(xì)胞增強因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PKC delta (Tyr311)  磷酸化蛋白激C亞性D型抗體 規(guī)格: 0.1ml

HBeAg(2E9)  人e抗原單克隆抗體（1） 規(guī)格: 0.1ml

RAB9  ras基因家族Rab9蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

RNF213  環(huán)指蛋白213 規(guī)格: 0.2ml