乙型肝炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人骨髓間充質干細胞（hMSCs）

嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus香菇 Lentinula edodes

基質金屬蛋白酶15(MMP15)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 15 (MMP15)

3% NaC1賴氨酸脫羧酶發酵管BR20支國產/進口

PC-12(高分)，PC12，大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分細胞株(高分)gersion

CNE-2Z(人鼻咽細胞)5×106cells/瓶×2

C6, 大鼠腦膠質瘤細胞SF17(人腦瘤細胞)

小鼠腎成纖維細胞*培養基100mL

小鼠肝動脈平滑肌細胞*培養基293E(人胚腎細胞（EBNA1基因修飾）)

RIN-m5f(大鼠胰島β細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

長尾綠猴胚胎細胞英文名稱：4179

乙型肝炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書二水合皮苷  Two hydrated root bark  436.41分子量：C21H24O10*：60-81-1

2,6-二溴甲  249.93  2,6- dibromo toluene*：69321-60-4分子量： C7H6Br2

乙酸鉀  174.24  Potassium phenyl acetate*：13005-36-2分子量： C8H7KO2

1,1,1-三氟乙酰丙酮銅(II)  369.7  1,1,1 -三氟乙酰丙酮銅（II）*：14324-82-4分子量： C10H8CuF6O4

(2-羥乙)氯三  342.8  (2- hydroxyethyl) three benzyl chloride*：23250-03-5分子量： C20H20ClOP

4-羥-2-甲喹啉  159.18  4- hydroxy -2- methyl group*：607-67-0分子量： C10H9NO

六  534.7  Six phenyl benzene*：992-04-1分子量： C42H30

6-溴-2-氯喹啉  242.5  6- -2- chloride*：1810-71-5分子量： C9H5BrClN

無花果蛋白酶  Fig protease  分子量：*：819

1,3,5-三(炔丙氧代)  240.26  1,3,5- three (Que Bingji) benzene*：114233-80-6分子量： C15H12O3

TMS-PZ    TMS-PZ*：dfs分子量：

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。