紅斑丹毒絲菌PCR檢測試劑盒說明書

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

胰高血糖素(GC)重組蛋白英文名稱：Recombinant Glucagon (GC)

角蛋白7(KRT7)重組蛋白英文名稱：Recombinant Keratin 7 (KRT7)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae立枯絲核菌 Rhizoctonia solani

AllIP/Co-IP Kit(Rabbit/Human/Rat)通用型免疫沉淀試劑盒(兔/人/大鼠)50次試劑盒

神經束蛋白(NFASC)重組蛋白英文名稱：Recombinant Neurofascin (NFASC)

牛奶蛋白胨/蛋白胨C/Peptonized milkBR100/500克國產/進口

考馬斯亮藍G-250人少突膠質細胞

EC109，人食管細胞 Human

猴菌嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus

現隱肉湯/Presence Absence Broth水中大腸菌群計數250克國產/進口

鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

紅斑丹毒絲菌PCR檢測試劑盒說明書戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus人視網膜muller細胞*培養(yǎng)基

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipesMCF-7 [MCF7], 人腺細胞系

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum屎腸球菌 Enterococcus faecium

透質酸酶(含10mL酶解緩沖液)香菇 Lentinula edodes

泡盛曲霉 Aspergillus awamoriCitrate Buffer(100x)/檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復液, 100x)

百脈根根瘤菌 Rhizobium loti釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

OP9(小鼠骨髓基質細胞)鏈霉菌 Streptomyces sp.

植物桿菌 Lactobacillus plantarum人膀胱平滑肌細胞*培養(yǎng)基

雙孢蘑菇rCSC, 大鼠心肌細胞

小鼠巨噬細胞釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

人胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基鏈霉菌 Streptomyces sp.

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeAmmonium Persulfate(APS)

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質細胞)黃綠綠僵菌 Metarhizium flavoviride

炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius人肝氟尿嘧啶耐藥株

中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuiiU251人膠質瘤細胞