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      梔子LAMP鑒定試劑盒使用方法

      更新時(shí)間:2023-07-25      點(diǎn)擊次數(shù):655

      梔子LAMP鑒定試劑盒使用方法:

      一、樣品采集:

      1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

      2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。

      3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

      4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

      一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)

      1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。

      2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

      3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

      4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

      5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

      6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

      7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

      注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測。?

      二、DNA提取:

      可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。

      1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

      2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

      3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

      4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

      注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。?

      API5凋亡抑制因子5抗體

      AQP3水通道蛋白-3抗體

      APOD載脂蛋白D抗體

      AIFM2線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體

      ABL2ABL2蛋白抗體

      ACE血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE1抗體

      ACE2血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體

      AcinusAcinus抗體

      Ack1醋酸激酶1抗體

      ACTH 促腎上腺皮質(zhì)激素抗體

      ACTH 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體

      ACTH 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH 抗體

      ADNP活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體

      Alpha 1 Acid Glycoproteinα1酸性糖蛋白1/類粘蛋白1抗體

      Alpha 1 acid glycoprotein 2α1酸性糖蛋白2抗體

      phospho-AQP2磷酸化水通道蛋白2抗體

      Vasopressin抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體

      ABCF1ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體

      AKR1B1醛糖還原酶抗體

      Serum albumin人血清白蛋白抗體


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