幼蟲芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒反應(yīng)五要素

幼蟲芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

α1酸性糖蛋白2抗體（類粘蛋白2）

磷酸化水通道蛋白2抗體

抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體

ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體

醛糖還原酶抗體

人血清白蛋白抗體

活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體

腺苷酸激酶-1抗體

纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體

聚集蛋白抗體

調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體

調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體

間變型淋巴瘤激酶抗體

膜粘連蛋白A1抗體

自噬相關(guān)蛋白1抗體

β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體

銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體

水通道蛋白-7抗體

p21活化蛋白激酶ARHG7抗體

磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體

2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體

血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體

腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體